培养基的配制,ypda培养基如何配制

培养基的配制，ypda培养基如何配制？

20g蛋白胨，10g酵母抽提物，2g葡萄糖适量双蒸水溶解，15mL百分之零点二腺嘌呤溶液，定容到1L，120℃高压灭菌15分钟，室温贮存！

固体部分：YPDA液体培养基中加入2%的琼脂粉，120℃高压灭菌小15分钟，铺板，待凝固后4℃贮存。

配制培养基有哪些步骤？

培养基的配制步骤大方向一般有四步：

选择原料。培养基不同成分的选择，称量，处理（比如琼脂要剪碎，土豆要切块等）处理原料。如果是固体培养基需要煮培养基，加入不同成分煮沸，分装试剂，液体培养基则溶解装入锥形瓶或者试管。灭菌处理。一般是湿热灭菌，即在灭菌锅中处理。倒平板。培养基稍微冷却后倒平板。

ms培养基中肌醇怎么配制？

一般配制浓缩液如10x，溶解在纯水中，定容后使用0.25um无菌滤膜过滤除菌，无菌试剂瓶保存备用。

马铃薯培养基如何制作呢？

材料： 马铃薯20g、蔗糖 2g、自来水 100mL、琼脂 2g、pH 自然(约6.0) 灭菌：1.05kg/cm2，20min 马铃薯处理方法: 马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min(注意火力的控制，可适当补水) ，用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶。 综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖)，补足水分，分装，灭菌，备用。 把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 按所用原料不同，可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。马铃薯培养基就是天然培养基，综合马铃薯培养基就是人工合成的。 不同的生物需要不同培养基，注意配方的选取，称取要准确，误差不能太大对于特殊物品，不能灭菌的要用过滤方法除菌。配好后高温高压灭菌，可以在室温下放置很久，如果打开使用过一次，请放置冰箱。如果长时间不用，一定要重新配置，不能拿以前的用来培养，避免污染。 培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。 (一)配料 按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。 (二)溶化 将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕，补足失去的水分。(三)矫正pH 1.pH测定 取与标准管同口径的试管(通常用华氏试管)3支，于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g/L的酚红0.25ml作为测定管，混匀;于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管。 2.pH的校正 若测定管过酸或过碱可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸溶液矫正，直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混匀，比色后再加第2滴(有时仅加半滴)准确记录加入的量。 3.计算 设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L氢氧化钠0.15ml，现有培养基4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算：5∶4990=0.15∶X X=0.15×4990/5=149.7(ml) 如将此0.1mol/L的氢氧化钠改用1mol/L的氢氧化钠时，则需14.9ml即可。 (四)过滤澄清 培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下： 1.液体培养基 液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白(1000ml培养基用1个鸡蛋白)在100℃加热后保持60～70℃40～60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。 2.固体培养基 如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤;亦可用自然沉淀法，即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内，以高压(103.43kPa)蒸汽融化15分钟后，静置高压锅内过夜，次日将琼脂倾出，用刀将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的琼脂培养基。 (五)分装 1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。 2.琼脂斜面分装量为试管容量的1/5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长约为试管长的2/3. 3.半固体培养基分装量约为试管长的1/3，灭菌后直立凝固待用。 4.高层琼脂分装量约为试管的1/3，灭菌后趁热直立，待冷后凝固待用。 5.液体培养基分装于试管中，约是试管长度的1/3. 6.琼脂平板：将灭菌(或加热融化)后的培养基冷至50℃左右，以无菌手续倾人灭菌平皿内，内径225px的平皿倾注培养基约13～15ml，轻摇平皿底，使培养基平铺于平皿底部，待凝固后即成，倾注培养基时，切勿将皿盖全部启开，以免空气中尘埃及细菌落入。 新制成的平板培养基(简称平板)，表面水分较多，不利于细菌的分离，通常应将平皿倒扣搁置于37℃培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用。

制备培养基需要什么器材？

一、细胞培养需要的设施器材

设施：超净台、恒温培养箱、倒置显微镜、液氮储存罐、电热鼓风干燥箱、冰柜、电子天平、恒温水浴槽、离心机、压力蒸汽消毒器。

器材：

⒈玻璃器材

培养皿、滴流瓶、刻度吸管、离心管、培养瓶、烧杯、量筒、三角烧瓶

⒉塑料器材

多孔培养板、培养皿、培养瓶

⒊橡皮器材

橡皮制品（建议是硅制品）做各种瓶或试管的塞子、盖子。

⒋金属器材

剪刀、镊子、手术刀、解剖刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头

⒌其他物品

纱布、注射器和针头

二、细胞培养的一般过程

⒈准备工作

准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。

⒉取材

在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。

⒊培养

将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

⒋冻存及复苏

为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。